PEPSIN
Pepsinum
Pepsin laø cheá phaåm daïng
boät chöùa men tieâu protein, laáy töø nieâm maïc coøn töôi cuûa daï daøy lôïn,
traâu, boø hoaëc cöøu, taùc duïng trong moâi tröôøng acid (pH töø 1 ñeán 5),
phaûi coù hoaït löïc khoâng ít hôn 0,5 ñôn vò trong 1 mg, tính theo cheá phaåm
ñaõ laøm khoâ.
Ñoäng vaät laáy boät pepsin
phaûi ñaùp öùng caùc yeâu caàu veà söùc khoûe ñoäng vaät phuø hôïp söû duïng
cho ngöôøi vaø yeâu caàu cuûa cô quan
coù thaåm quyeàn.
Phaûi chæ ra phöông phaùp
ñaõ duøng ñeå loaïi boû söï nhieãm virus hay caùc taùc nhaân gaây nhieãm khaùc.
Tính chaát
Boät keát tinh hoaëc voâ
ñònh hình maøu traéng hay vaøng nhaït,
huùt aåm. Tan trong nöôùc thöïc teá khoâng tan trong ethanol 96% .
Dung dòch trong nöôùc coù theå hôi ñuïc lôø vaø coù phaûn öùng acid nheï
Ñònh tính
Trong coái söù
cho 30 mg fibrin xanh (TT), taïo hoãn dòch vôùi 20 ml dung dòch acid hydrocloric loaõng (TT).
Loïc hoãn dòch vaø röûa giaáy loïc vôùi dung
dòch acid hydrocloric loaõng (TT) cho ñeán khi dòch loïc
khoâng maøu. Choïc
thuûng giaáy loïc vaø traùng hoãn dòch fibrin xanh qua loã thuûng vaøo moät
bình noùn baèng 20 ml dung dòch acid
hydrocloric loaõng (TT). Laéc hoãn hôïp naøy tröôùc khi duøng. Hoaø tan moät löôïng cheá phaåm khoâng
ít hôn 20 ñôn vò hoaït löïc trong 2 ml dung
dòch acid hydrocloric loaõng (TT) vaø ñieàu chænh ñeán pH 1,6 +
0,1 (dung dòch thöû). Cho vaøo hai oáng nghieäm, moãi oáng 4 ml hoãn dòch fibrin
ñöôïc ñieàu cheá ôû treân. Theâm vaøo moät oáng 1 ml dung dòch thöû vaø oáng
coøn laïi 1 ml nöôùc (maãu traéng).
Troän ñeàu caùc oáng vaø cho vaøo noài caùch thuyû ôû 25 oC,
laéc nheï trong 15 phuùt. Dung dòch maãu traéng khoâng coù maøu vaø dung dòch
thöû phaûi coù maøu xanh.
Maát khoái löôïng do laøm khoâ
Khoâng ñöôïc quaù 5,0% (Phuï
luïc 9.6).
(0,500 g; phosphor pentoxyd;
aùp suaát khoâng quaù 0,7 kPa; 60 oC; 4 giôø).
Giôùi haïn vi khuaån
Tổng số vi khuẩn hiếu khí sống lại được: Không
được quá 104 khuẩn lạc/gam.
1,0 g cheá phaåm khoâng
ñöôïc coù Escherichia coli vaø 10 g
cheá phaåm khoâng ñöôïc coù Salmonella
(Phuï luïc 13.6).
Ñònh löôïng
Hoaït löïc cuûa pepsin ñöôïc
xaùc ñònh baèng caùch so saùnh löôïng peptid, khoâng bò tuûa bôûi dung dòch acid tricloroacetic (TT) vaø ñöôïc ñònh löôïng baèng caùch söû
duïng thuoác thöû phosphomolibdotungstic, giaûi phoùng töøng
phuùt töø cô chaát laø dung dòch hemoglobin, vôùi löôïng peptid giaûi phoùng töø pepsin vôùi cuøng cô chaát vaø cuøng ñieàu kieän.
Traùnh laéc vaø laøm suûi
boït caùc dung dòch thöû vaø dung dòch chuaån trong quaù trình ñònh löôïng.
Dung dòch thöû: Chuaån bò ngay tröôùc khi duøng
moät dung dòch chöùa 0,5 ñôn vò/ml trong dung
dòch acid hydrocloric loaõng (TT). Tröôùc khi pha loaõng ñeán theå
tích caàn thieát ñieàu chænh ñeán pH 1,6 ± 0,1 neáu caàn baèng dung dòch acid hydrocloric 1 M (TT).
Dung dòch ñoái chieáu:
Chuaån bò dung dòch pepsin chuaån (ĐC) chöùa 0,5 ñôn vò/ml trong dung dòch acid hydrocloric loaõng (TT).
Tröôùc khi pha loaõng ñieàu chænh ñeán pH 1,6 ± 0,1 neáu caàn baèng dung dòch acid hydrocloric 1 M (TT).
Chæ pha trong voøng 15 phuùt
tröôùc khi duøng.
Chuaån bò caùc caëp oáng
nghieäm T, Tb, S1,
S1b, S2, S2b,
S3. S3b vaø oáng B.
Theâm dung dòch acid hydrocloric
loaõng (TT) vaøo caùc oáng nghieäm nhö sau:
B: 1,0 ml
S1 vaø S1b:
0,5 ml
S2 , S2b, T,
vaø Tb: 0,25 ml
Theâm dung dòch ñoái chieáu vaøo
caùc oáng nghieäm nhö sau:
S1 vaø S1b:
0,5 ml
S2 , vaø S2b,
: 0,75 ml
S3. vaø S3b
: 1,0 ml
Theâm 0,75 ml dung dòch thöû vaøo
oáng nghieäm T vaø Tb.
Theâm10,0 ml dung dòch acid tricloroacetic (TT) vaøo caùc oáng S1b,S2b,
S3b, Tb vaø
B. Troän ñeàu.
Ñaët caùc oáng nghieäm
vaø dung
dòch hemoglobin (TT) trong caùch
thuyû ôû nhieät ñoä 25 ± 0,1 °C.
Khi nhieät ñoä ñaõ caân baèng theâm 5,0 ml dung
dòch hemoglobin (TT) vaøo oáng nghieäm B, S1b,
S2b, S3b vaø Tb. Troän ñeàu.
Theâm 5,0 ml dung dòch hemoglobin (TT) laàn löôït vaø caùch nhau 30 giaây
vaøo oáng nghieäm S1, S2, S3 vaø
T. Troän ñeàu ngay sau moãi laàn theâm.
Ñuùng 10 phuùt sau khi theâm
dung dòch hemoglobin
(TT) döøng phaûn öùng baèng caùch
theâm
theâm10,0 ml dung dòch acid tricloroacetic (TT) vaøo oáng S1, S2,
S3 vaø T moãi laàn caùch nhau 30 giaây. Troän ñeàu.
Loïc caùc oáng nghieäm (thöû
vaø traéng) qua giaáy loïc thích hôïp ñaõ ñöôïc röûa tröôùc baèng dung dòch acid tricloroacetic 5% (TT)
sau ñoù laø nöôùc vaø laøm khoâ. Boû 5 ml dòch loïc ñaàu. Laáy 3,0 ml moãi
dòch loïc rieâng bieät vaøo oáng nghieäm chöùa 20 ml nöôùc. Troän ñeàu.
(Giaáy loïc thích hôïp laø
giaáy loïc ñaùp öùng caùc pheùp thöû sau:
Loïc 5 ml dung dòch acid tricloroacetic 5% qua moät giaáy loïc traéng, troøn ñöôøng
kính 7 cm. Ño ñoä haáp thuï cuûa dòch loïc ôû 275 nm (Phuï luïc 4.1), duøng dung dòch acid tricloroacetic 5% (TT) khoâng
loïc laøm maãu traéng, phaûi ít hôn 0,04).
Toaøn boä quaù trình treân
ñöôïc ghi ôû baûng sau:
|
OÁng nghieäm |
|||||||||
|
|
S1 |
S1b |
S2 |
S2b |
S3 |
S3b |
T |
Tb |
B |
|
Dung dòch acid hydrocloric loaõng (TT)
(ml) |
0,5 |
0,5 |
0,25 |
0,25 |
|
|
0,25 |
0,25 |
1,0 |
|
Dung dòch ñoái chieáu (ml) |
0,5 |
0,5 |
0,75 |
0,75 |
1,0 |
1,0 |
|
|
|
|
Dung dòch thöû (ml) |
|
|
|
|
|
|
0,75 |
0,75 |
|
|
Dung dòch acid tricloroacetic (TT) (ml) |
|
10,0 |
|
10,0 |
|
10,0 |
|
10,0 |
10,0 |
|
Troän |
|
+ |
|
+ |
|
+ |
|
+ |
+ |
|
Caùch thuûy ôû 25 oC |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
|
Dung dòch hemoglobin
(TT) (ml) |
|
5,0 |
|
5,0 |
|
5,0 |
|
5,0 |
5,0 |
|
Troän |
|
+ |
|
+ |
|
+ |
|
+ |
+ |
|
Dung dòch hemoglobin
(TT) (ml) |
5,0 |
|
5,0 |
|
5,0 |
|
5,0 |
|
|
|
Troän |
+ |
|
+ |
|
+ |
|
+ |
|
|
|
Caùch thuûy ôû 25 oC
10 phuùt |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
|
Dung dòch acid tricloroacetic 4% (TT) (ml) |
10,0 |
|
10,0 |
|
10,0 |
|
10,0 |
|
|
|
Troän |
+ |
|
+ |
|
+ |
|
+ |
|
|
|
Loïc |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
Theâm vaøo moãi oáng nghieäm
1,0 ml dung dòch natri hydroxyd 20% (TT)
vaø 1,0 ml thuoác thöû phosphomolybdotungstic (TT) baét ñaàu töø caùc oáng traéng sau
laø caùc oáng thöû theo thöù töï nhö treân.
Sau 15 phuùt ño ñoä haáp thu
(Phuï luïc 4.1) cuûa dung dòch S1,
S2, S3, S1b, S2b, S3b ,T
vaø Tb ôû böôùc soùng 540 nm duøng dòch loïc cuûa oáng B laøm maãu
traéng.
Hieäu chænh ñoä haáp thu cuûa dòch loïc töø oáng S1, S2, S3
baèng caùch laáy ñoä haáp thu ño ñöôïc tröø ñi ñoä haáp thu dòch loïc S1b,
S2b, S3b theo thöù
töï.
Veõ ñöôøng cong chuaån giöõa
ñoä haáp thu ñaõ tính vaø hoaït löïc dung dòch ñoái chieáu ñaõ duøng.
Xaùc ñònh hoaït löïc cuûa
cheá phaåm duøng ñoä haáp thu cuûa dung dòch thöû (T – Tb) töø
ñöôøng cong chuaån vaø tính toaùn ñoä pha loaõng.
Baûo quaûn
Ñöïng trong loï kín, traùnh
aùnh saùng vaø ôû nhieät ñoä töø 2 ñeán 8 °C.